@article{oai:repository.naro.go.jp:00002083,
 author = {リーラマニット, ウィチェット and LEELAMANIT, Wichet and ブーンヨム, レルングウィット and BOONYOM, Rerngwit and パニム, サコール and PANYIM, Sakol and レデイ, チャンドラセカヤ and REDDY, Chandrasekhara and シン, マン and SINGH, Man and 林, 武司 and HAYASHI, Takeshi and 安江, 博 and YASUE, Hiroshi and 天野, 和宏 and AMANO, Kazuhiro},
 journal = {畜産草地研究所研究報告, Bulletin of National Institute of Livestock and Grassland Science},
 month = {Dec},
 note = {Molecular tools such as polymerase chain reaction (PCR)-based techniques have been widely used to analyze the genetic diversity of many social insects. Since their society has a very complicated and hierarchical structure, honeybees (Apis) will become a good model to study the evolution of social insects. In this report, we demonstrated a simple PCR-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) to distinguish different Apis species. In brief, mitochondrial DNA (mtDNA) was separately isolated from workers of five major honeybee species, Apis mellifera (Western honeybee), A. cerana (Eastern honeybee),A. dorsata (Giant honeybee), A. laboriosa (Himalayan giant honeybee), and A. florea (Dwarf honeybee), obtained from different geographical regions. Western and Eastern honeybees, A. dorsata and A. laboriosa, and A. florea were collected from Japan, Nepal, and India, respectively. The PCR technique was performed to amplify a 528-bp DNA fragment of the NADH dehydrogenase subunit 4 (ND4 according to A. mellifera’s mtDNA sequence). Following digestion of the individual PCR products with two restriction endonucleases, NdeI and MdeI, the digested DNA fragments were separated with agarose gel electrophoresis, stained with ethidium bromide and visualized over UV light. The results clearly indicated that this PCR-RFLP procedure was simple but sensitive and reproducible for the identification of the genetic variability among Apis species. Therefore， this procedure will be useful to confirm other techniques for the identification of honeybees., 社会性昆虫の遺伝的多様性の解析に， PCR法などの分子生物学的手法が幅広く用いられるようになってきている。社会性昆虫の中でも，ミツバチ（Apis 属）は，複雑な階層構造をもつ社会を構成し，社会性昆虫の進化研究の適当なモデルとなりうる。本報では，様々なミツバチの種を判別するための簡略なPCR-RFLP法を開発し，その有用性を示した。ミツバチの主要な5種であるヨーロッパミツバチ（A.mellifera），トウヨウミツバチ（A.cerana），オオミツバチ（A.dorsala), ヒマラヤオオミツバチ（A.laboriosa), ヒメミツバチ（A.florae）の働きバチを様々な地域で得た。ヨーロッバオオミツバチ，ヒマラヤオオミツバチ，ヒメミツバチはそれぞれ日本，ネパール，インドで採集した。これら5種の働きバチからミトコンドリアDNAを分離し，ヨーロッパミツバチの配列からプライマーを作製しPCR法を用いてNADH 脱水素酵素のサブユニット ４(ND4）を増幅した。さらに，それぞれのPCR 産物を2つ制限酵素NdelとMbolで分解し，DNA 断片をアガロースゲル電気泳動で分離して臭化エチジウムで染色した後，紫外線でバンドを検出し，DNA断片の長さから種判別を行なった。この開発されたPCR-RFLP法は簡略であるが，再現性があり，ミツバチ種の間の遺伝的な変異の検出に有効でることが明らかになった。したがって，この手法は他のミツバチ種の判別技術を補完するものとして有用であると考えられる。},
 pages = {1--5},
 title = {PCR法を用いたミツバチの簡略な種判別法},
 volume = {4},
 year = {2003},
 yomi = {リーラマニット, ウィチェット and ブーンヨム, レルングウィット and パニム, サコール and レデイ, チャンドラセカヤ and シン, マン and ハヤシ, タケシ and ヤスエ, ヒロシ and アマノ, カズヒロ}
}