A polymerase chain reaction-based DNA fingerprinting system for species identification of bacteria isolated from mastitic milk was developed using random amplified polymorphic DNA. A total of 662 isolates belonging to coliforms, Staphylococcus, Streptococcus, and Enterococcus species were used to develop the system. It is apparent from the present study that primer OEP-04 generated DNA fragments that can be used for differentiation and identification of members of the genera Staphylococcus, Streptococcus and Enterococcus species. The RAPD analysis of coliforms species using primer AP-45 has shown promising results for differentiation and identification of those bacteria. This technique is cost effective, simple to perform and may be adopted as a fast and easy identification technique by other laboratories involved in diagnosis of mastitis pathogens when a dedicated analysis software is developed in the future.
Random Amplification DNA Fingerprinting（RAPD）法により乳房炎主要原因菌であるブドウ球菌, レンサ状球菌, 大腸菌群の同定方法を検討した. 乳房炎乳汁から分離されたレンサ状球菌（8菌種；296株）, ブドウ球菌（9菌種；215株）, 大腸菌群（8菌種；151株）を市販簡易同定キットで同定し, 選定したプライマーを用いてRAPD法を実施した. その結果, ブドウ球菌およびレンサ状球菌の菌種識別に有望なプライマーOEP-04（gTgACATgCC）, 大腸菌群の菌種識別に有望なプライマーAP-45（gTCAACgAAg）を得ることができた. 供試レンサ状球菌は全て識別されたが, 供試ブドウ球菌中Staphylococcus hyicus とStaphylococcus simulans は識別できなかった. しかし, これら2菌種は他の供試ブドウ球菌と識別された. 供試大腸菌群のうちSerrataia marcescens は菌種に共通な遺伝子増幅産物は認められず, この菌種の識別に選定したプライマーによるRAPD法の応用は不可能と考えられたが, 他の7菌種はRAPD法により識別可能であった. 以上のことから, 一部の例外を除き, RAPD法により乳房炎主要菌種の同定は可能と考えられる.
雑誌名
動物衛生研究所研究報告
雑誌名(英)
Bulletin of the National Institute of Animal Health
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Random Amplification DNA Fingerprintingによる牛乳房炎主要原因菌種の同定
niah_report_No108p1-7p
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